细胞准备 率先，要确保所使用的细胞处于对数孕育期，细胞活力需大于 95%，这么才能保证细胞具有爽朗的穿透才略，使试验牺牲更准确可靠。淌若细胞活力不及，可能会导致细胞穿透才略下跌，影响最终的试验牺牲。 趋化因子遴荐 不错遴荐用 NIH3T3 细胞制备趋化因子，但需驻防该步履试验周期较长ag百家乐积分有什么用，体式繁琐。骨子上ag百家乐积分有什么用，胎牛血清中也含有趋化因子，且在一些试验中发现用胎牛血清和用 NIH3T3 细胞制备的趋化因子作念细胞体外侵袭试验成果左近，而用胎牛血清作趋化因子可大大从简试验时代。 Transwell 培养板准备 从 - 20℃取出 Matrigel 后，要在冰上 2℃-8℃过夜熔化。然后用预冷的枪头吸取 100μl Matrigel 加入冰预冷的 300μl 无血清培养基中，充分混匀。取 25 μl 稀释后的 Matrigel 加入 transwell 板上室，遮掩悉数聚碳酯膜，37℃甩掉 30 min，使 Matrigel 团聚成胶。已铺好 Matrigel 的 transwell 培养板置于 37℃可保存 2 周。 细胞接种与培养 刺激后的各组细胞用 PBS 漂洗 3 次，以惯例步履用无血清培养基制备单细胞悬液，AG真人百家乐怎么玩篡改细胞浓度至 5×10⁵个 /ml 。Transwell 培养板上室加入 100μl 细胞悬液，并加入无血清培养基 200 ul，下室加入 500μl 趋化因子，随后放入 37℃、5% CO₂培养箱中培养 24 h。 细胞固定与染色 用湿棉签轻轻擦去 Matrigel 凝胶和聚碳酯膜上名义的细胞，羁系取出上室，用线拴住并作念好秀雅，放入冰预冷的甲醇中固定 30 min。接着进行苏木素染色，新苏木素染色 1 min，用过屡次的苏木素则需 2 min，染色后要将实足苏木素洗去，再进行梯度酒精脱水，二甲苯透明。 牺牲不雅察与计数 羁系将聚碳酯膜自上室基底切取下来，置载玻片上中性树脂封片。在高倍镜下迅速取 6 个视线，对附着于聚碳酯膜下名义的细胞进行计数，取平均数。需要驻防的是，当细胞为圆形时，要驻防差异是穿夙昔的细胞一经聚碳酯膜上的小孔，幸免误计数。
发布日期：2024-10-28 16:58 点击次数：192