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跟着冬季驾临，季节性流感、肺炎等呼吸说念疾病高发，多地病院出现了就诊岑岭，实时为患者提供有用的协调，快速准确的会诊轮番显得尤为抨击。在迢遥检测轮番和检测试剂中，一步 RT-qPCR 法（一管式 RNA 全预混试剂）因其高效、方便、贤慧等上风，受到了平庸深爱。
在一步法反映中，表面上是基因特异性引物当先与待检测靶标匹配，并在逆转录酶的催化下合成第一链 cDNA，但是在实质应用中，泛泛会出现演叨的模板-引物匹配产生的非特异 cDNA。非特异性 cDNA 会使体系里面出现非特异性扩增，并浪掷反映所需组分，畛域后续主反映进行，当靶核酸的浓度较低时，会因为竞争作用而使得扩增性能变差，如扩增弧线模式差、荧光增量低、Ct 值滞后等，从而大大镌汰检测试剂的贤慧度和特异性。
另外，由于一管式 RNA 全预混试剂是将酶液和引物探针以及反映液提前预混在一管，在永久保存过程中，酶液活力很容易着落或者平直失活，从而导致全预混试剂性能出现问题。
逆转录（RT）酶，看成其要害要素，其性能将平直影响一步法核酸检测试剂的准确性和贤慧度，普及逆转录酶的特异性和理解性对一管式 RNA 全预混试剂的开采至关抨击。
基于此，瀚海新酶针对一步法 RT-qPCR/PCR 场景和一管式 RNA 全预混试剂开采了一款温驱动逆转录酶，其在低温下，酶活被顽固并在职责温度下激活，幸免了低温下的引物-模板演叨匹配和逆转，普及了检测特异性和贤慧度。该款逆转录酶是收受适配体的轮番进行的热驱动修饰，瀚海新酶运用适配体筛选平台，制备了高大的寡核苷酸立时序列文库，并在传统 SELEX 适配体筛选时候的基础上进行优化翻新，运用高通量测序替代传统的克隆测序，经过多轮筛选和富集，登科了逆转录酶亲和力高的适配体，再将这些亲和力高的序列与逆转录酶进行孵育搀杂，然后测试低和蔼职责温度下不同适配体修饰酶的酶活，从而笃定顽固和激活成果较优的适配体，同期对适配体进行组合筛选和对酶修饰工艺进行优化。最终瀚海新酶经过多半筛选和酶修饰工艺优化，开采的温驱动逆转录酶在 42℃ 下可顽固 99% 的酶活，比拟于市面同类竞品在低温下的顽固成果更好，顽固理解性更强，Ag百家乐使反映液能永久合手续理解高效地取得逆转录产物，贬责了全预混试剂储存理解性的艰难。同期，该居品在职责温度（55℃）下，即可开释 95% 以上的酶活，保证了试剂的扩增贤慧度。
图 1. 瀚海新酶温驱动逆转录酶顽固旨趣默示图（A）和适配体筛选进程图（B）
优厚的居品质能
全顽固
在进⾏适配体修饰顽固之后，瀚海新酶温驱动逆转录酶在非职责温度 30℃/ 37℃ / 42℃下酶活性极低，顽固效力显耀优于竞品 A，这对畛域非特异性扩增更成心，而在职责温度下（55℃），活性即可弥散开释，对扩增性能无任何影响。（图2）
图 2. 瀚海新酶温驱动逆转录酶的顽固/激活成果图；
高贤慧
收成于温驱动特色，瀚海新酶温驱动逆转录酶省略保证在低浓度模板情况下，仍能扩增特异性靶标，扩增平台期与高拷贝数模板一致（图 3A），且瀚海新酶整套温驱动逆转录酶居品和同类竞品 A 比拟，永别在 3 个不同体系里进行测试，瀚海新酶居品无论从 Ct 值出峰时间已经检出率来看，其性能均优于竞品 A（图 3B）。
图 3. 瀚海新酶和竞品 A 温驱动逆转录酶性能比较；图 A. 在某全预混体系里进行高，中，低浓度模板的测试；图 B. 整套居品在不同体系里的测试
超快速
瀚海新酶温驱动逆转录酶经过矫正，省略以更快的速度合成 cDNA，在 PCR 法子一致的情况下，2 min 逆转录可达到和 15 min 逆转录相似的贤慧度。
图 4. 瀚海新酶温驱动逆转录酶在不同法子下的扩增情况
长理解
在某两个RNA 名目一管式液体全预混反映液（RNA 全预混，反映液、酶液、引物探针提前预混在一管）中，经37℃ 加压 7 天，瀚海新酶温驱动逆转录酶性能不受影响，而竞品 A 经 37℃ 加压 7 天后，扩增性能严重逾期，贤慧度延后超 2 个Ct。
图 5. 瀚海新酶温驱动逆转录酶加快后性能
应用案例共享
瀚海新酶温驱动逆转录酶匡助客户优化和贬责了不同问题，尤其是在 RNA 全预混理解性中的应用最为隆起，具体案例应用成果共享如下。
比拟于市面同类温驱动逆转录酶，瀚海新酶温驱动逆转录酶可在更高温度下顽固酶活，顽固效力更高、顽固理解性更强，可驻守引物探针等要害要素的降解，在确保高贤慧和兼容快速法子的前提下，赋予全预混试剂更高理解性。
将瀚海新酶温驱动逆转录酶和同类竞品 A 永别应用于 RNA 全预混试剂中（反映液、酶液、多重引物探针提前预混在一管），经 37℃ 加压 10天处理，新配制的全预混试剂作对照，在 30min 快速法子下测试。驱散露馅：使用瀚海新酶温驱动逆转录酶配制的全预混试剂在加压处理要求下与新配制的对照组无显耀各异，而使用竞品 A 配制的全预混试剂在加压处理后，扩增效力彰着镌汰（Ct 值靠后，荧光平台期着落）。
图 6. 瀚海新酶温驱动逆转录酶应用在全预混试剂中 37℃ 加快 10 天检测驱散（红色弧线为加快后弧线）
关系居品
